原代細(xì)胞

客戶(hù)收到細(xì)胞后，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作。
1、取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置2-3h，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)；
2、細(xì)胞拍照，留存照片；
3、待細(xì)胞達(dá)到80%匯合時(shí)準(zhǔn)備進(jìn)行傳代培養(yǎng)；
4、收集T-25培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，保留，用PBS清洗細(xì)胞一次；
5、添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，37℃溫浴，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后吸棄消化液，再加入完全培養(yǎng)液終止消化；
6、用吸管輕輕吹打混勻，按1:2適當(dāng)?shù)谋壤M(jìn)行接種傳代，然后補(bǔ)充新鮮的完全培養(yǎng)基至5ml，放入37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；7、待細(xì)胞完全貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的完全培養(yǎng)基。

注意事項(xiàng)
1、培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月；
2、在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，請(qǐng)注意保持無(wú)菌操作；
3、傳代培養(yǎng)過(guò)程中，胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長(zhǎng)狀態(tài)；
4、懷信生物提供完全培養(yǎng)基，更有利于細(xì)胞生長(zhǎng)；
5、該細(xì)胞只可用于科研。

備注：由于實(shí)驗(yàn)所用試劑與操作環(huán)境的不同，以上方法供各實(shí)驗(yàn)室參考。