一、服務(wù)簡(jiǎn)介
從細(xì)胞中提取基因組DNA和總RNA后，仍混雜著蛋白質(zhì)、多糖和各種大小分子核酸同類物。除去這些“雜質(zhì)”的過(guò)程，也就是核酸提純過(guò)程。在核酸的分離純化時(shí)，為防止核酸大分子的變性降解，必須在0～4℃的低溫條件下操作。核酸酶的水解作用，是過(guò)去制備具有活性核酸大分子的嚴(yán)重障礙，現(xiàn)普遍采用加入去污劑或加入EDTA、8-羥基喹啉、檸檬酸鈉以除去核酸酶的激活劑Mg2+，就可以抑制核酸酶的活性，保證在提純過(guò)程中核酸大分子的完整。
TRIZOL試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質(zhì)分離，并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯，仿時(shí)，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進(jìn)入水相，離心后可形成水相層和有機(jī)層，這樣RNA與仍留在有機(jī)相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開(kāi)。水相層（無(wú)色）主要為RNA，有機(jī)層（黃色）主要為DNA和蛋白質(zhì)。
二、技術(shù)流程 總RNA提取（Trizol提取）實(shí)驗(yàn)步驟
在收集到生物材料之后，最好能即刻進(jìn)行RNA 制備工作。若需暫時(shí)儲(chǔ)存，則應(yīng)以液氮將生物材料急速冷凍后，儲(chǔ)存于-80℃冷凍柜。在制備RNA 時(shí)，將存于冷凍柜的材料取出，立即以加入液氮研磨的方式打破細(xì)胞，不可以先行解凍，以避免RNase的作用。
1. 提取組織RNA 時(shí)，每50～100mg 組織用1ml Trizol試劑對(duì)組織進(jìn)行裂解；提取細(xì)胞RNA 時(shí)，先離心沉淀細(xì)胞，每5-10 ╳106 個(gè)細(xì)胞加1ml Trizol后，反復(fù)用槍吹打或劇烈振蕩以裂解細(xì)胞；
2. 將上述組織或細(xì)胞的Trizol裂解液轉(zhuǎn)入EP 管中,在室溫15~30C下放置5 分鐘
3. 在上述EP 管中，按照每1ml TRIZOL 加0.2ml 氯， 仿的量加入氯， 仿，蓋上EP管蓋子，在手中用力震蕩15 秒，在室溫下（15℃～30℃）放置2～3 分鐘后，12000g（2℃～8℃）離心15 分鐘；
4. 取上層水相置于新EP 管中,按照每1ml TRIZOL 加0.5ml 異丙醇的量加入異丙醇，在室溫下（15℃～30℃）放置10 分鐘,12000g（2℃～8℃）離心10 分鐘
5. 棄上清，按照每1ml TRIZOL 加1ml 75%乙醇進(jìn)行洗滌，渦旋混合，7500g（2℃～8℃）離心5 分鐘，棄上清；
6. 讓沉淀的RNA 在室溫下自然干燥；
7.用Rnase-free water 溶解RNA 沉淀。
三、服務(wù)說(shuō)明
1、客戶提供：待提取的細(xì)胞或組織；
2、RNA提取物，及測(cè)定濃度數(shù)據(jù)。
四、成果展示
五、詢價(jià)及訂購(gòu) 感謝您選擇我公司的RNA提取服務(wù)。如有相關(guān)問(wèn)題請(qǐng)聯(lián)系我們的工作人員。